超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金屬輔基的酶，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過氧化氫

(H2O2)和氧氣(O2)，是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，由于超氧自由基是不穩(wěn)定的的自由基，壽命極短，SOD活性一般用間接

方法測定，并利用各種呈色反應(yīng)來測定SOD活力，其中顯色劑有NBT(唑藍四氮)、WST-1、WST-8等。

總超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(NBT核黃素微板法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with NBT)是一種基于

NBT的光還原反應(yīng)，所以又稱作NBT光還原法，檢測原理是在有氧化物質(zhì)存在下核黃素被光還原，在有氧條件下，被還原的核黃

素極易再氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基(O2.-)，O2.-可將氮藍四唑還原為藍色的甲腙，后者在560nm處有強吸收，而SOD可清除

超氧陰離子(O2.-)，從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應(yīng)后，反應(yīng)液藍色愈深，說明SOD活性愈低，反之酶活性愈高，

據(jù)此通過酶標儀比色分析就可以計算出樣品中總超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用SOD抑制NBT在光照下的還原作用來

確定酶活性大小，可用于檢測植物、組織、細胞、血清或其它樣品中SOD活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，

不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零)，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照孔為對照調(diào)零，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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