細胞名稱：BEL7404人肝癌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS2865CHUP-T3人胰腺癌細胞

YS2866C OE21人食道鱗狀癌細胞

YS2867C TYK-nu人卵巢癌細胞

YS2868C TOV-21G人上皮性卵巢癌細胞

YS2869C CHL-1人黑色素瘤細胞

YS2870C HUP-T4人胰腺癌細胞

YS2871C BpRc1小鼠肝癌細胞

YS2872C OVMANA人卵巢癌細胞

YS2873C LIXC-011人肝癌細胞

YS2874C LIXC-003人肝癌細胞

YS2875C LIC-0903LIC干細胞

YS2876C ATN-1人T白血病細胞細胞

YS2877C KP-N-YN人平滑肌細胞

YS2878C C8-D1A[AstrocytetypeIclone]小鼠小腦細胞

YS2879C COR-L105人原發(fā)性非小細胞肺癌

YS2880C BHK倉鼠腎成纖維細胞

YS2881C BEL7404人肝癌細胞

YS2882C Balb/3T3小鼠胚胎成纖維細胞

YS2884C AZ-521人胃癌細胞

YS2885C RCC10RGB人腎癌細胞

YS2886C HCC-78細胞

YS2887C DC2.4DC2.4

YS2888C NCI-H3122NCI-H3122

YS2889C mpc-5足細胞

YS2890C JAR(胎盤絨毛癌細胞

YS2891C MDCKMDCK細胞

YS2892C HEB人腦膠質(zhì)細胞

YS2893C HIC-2小腸癌細胞

YS2894C 人T白血病細胞細胞

YS2895C 人急性淋巴白血病細胞細胞

YS2896C DMS-79人小細胞肺癌

YS2897C NCI-H2052人惡性胸膜間皮瘤細胞

YS2898C GA-10人B淋巴瘤細胞

YS2899C EB-3人伯基特淋巴瘤細胞

YS2900C NCI-H217人肺鱗癌細胞

YS2901C HOP-92人小細胞肺癌細胞

YS2902C ECC10人子宮內(nèi)膜癌細胞

YS2903C COLO684人子宮腺癌細胞

YS2904C NCI-H28人惡性間皮瘤細胞

YS2905C C33A人宮頸癌細胞

YS2906C PC-9/GRPC-9GR（PC-9耐藥株）

YS2907C ECC12人子宮內(nèi)膜癌細胞

YS2908C C2C12小鼠胚胎肌母小鼠胚胎肌母細胞

YS2909C c918人眼脈絡(luò)黑色瘤細胞

YS2910C HCT116/L人結(jié)腸癌耐藥株

YS2911C 5-8F鼻咽癌細胞

YS2912C K1人甲狀腺癌細胞

YS2913C Bcpap人甲狀腺癌乳頭狀細胞

YS2914C MDA-MB-231-luc人乳腺癌細胞

YS2915C hs68男性正常龜頭細胞

YS2916C NCI-H1694人小細胞肺癌

YS2917C MUTZ-3急性非淋巴白血病細胞

YS2918C U373人腦膠質(zhì)瘤細胞

YS2919C 小鼠肝癌22(H22)(H22)小鼠肝癌22

YS2920C ID8ID8小鼠卵巢癌細胞

YS2921C KYSE-14人食管鱗癌細胞

YS2922C TU686TU686人喉癌細胞

YS2923C KCL-22人慢性粒白血病細胞細胞

YS2924C U343人腦膠質(zhì)瘤細胞

YS2925C tpc-1人甲狀腺乳頭狀細胞

YS2926C MDBKMDBK牛腎細胞

YS2928C SNB-19人膠質(zhì)瘤細胞

YS2929C SNU-368人肝癌細胞

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