細胞名稱：WISH人羊膜/羊膜成纖維細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS1078P小鼠卵巢顆粒原代細胞

YS1079P小鼠子宮頸上皮原代細胞

YS1080P小鼠子宮平滑肌原代細胞

YS1081P小鼠卵巢上皮原代細胞

YS1082P小鼠子宮成纖維原代細胞

YS1083P小鼠卵巢成纖維原代細胞

YS1084P小鼠腎實質(zhì)原代細胞

YS1085P小鼠膀胱平滑肌原代細胞

YS1086P小鼠腎小管上皮原代細胞

YS1087P小鼠腎小球內(nèi)皮原代細胞

YS1088P小鼠前列腺上皮原代細胞

YS1089P小鼠腎皮質(zhì)上皮原代細胞

YS1090P小鼠膀胱成纖維原代細胞

YS1091P小鼠腎足突原代細胞

YS1092P小鼠腎成纖維原代細胞

YS1093P小鼠尿道上皮原代細胞

YS1094P小鼠輸尿管上皮原代細胞

YS1095P小鼠心肌原代細胞

YS1096P小鼠心肌成纖維原代細胞

YS1097P小鼠主動脈內(nèi)皮原代細胞

YS1098P小鼠主動脈平滑肌原代細胞

YS1099P小鼠血管外膜成纖維原代細胞

YS1100P小鼠大隱靜脈平滑肌原代細胞

YS1101P小鼠冠狀動脈平滑肌原代細胞

YS1102P小鼠大隱靜脈內(nèi)皮原代細胞

YS1103P小鼠冠狀動脈內(nèi)皮原代細胞

YS1104P小鼠滑膜原代細胞

YS1105P小鼠骨骼肌原代細胞

YS1106P小鼠真皮成纖維原代細胞

YS1107P小鼠軟骨原代細胞

YS1108P小鼠破骨原代細胞

YS1109P小鼠前脂肪原代細胞

YS1110P小鼠成骨原代細胞

YS1111P小鼠關(guān)節(jié)軟骨原代細胞

YS1112P小鼠表皮角質(zhì)形成原代細胞

YS1113P小鼠腦膜原代細胞

YS1114P小鼠海馬神經(jīng)元原代細胞

YS1115P小鼠腦微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1116P小鼠腦成纖維原代細胞

YS1117P小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)原代細胞

YS1118P小鼠小腦顆粒原代細胞

YS1119P小鼠嗅鞘原代細胞

YS1120P小鼠視網(wǎng)膜Muller原代細胞

YS1121P小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)原代細胞

YS1122P小鼠角膜成纖維原代細胞

更多細胞歡迎咨詢我們：WISH人羊膜/羊膜成纖維細胞ATCC