細胞名稱：MEF小鼠胚胎成纖維細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存

包括營養(yǎng)液、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS961CTU686人喉癌細胞

YS962CU20S人成骨肉瘤細胞

YS963CU251MG瘤細胞人類星形膠質細胞

YS964C瘤U-87MG人腦星形膠質母細胞

YS965CVCaP人前列腺癌細胞

YS966CWRL68人正常肝細胞

YS967CXWLC-05云南宣威人肺腺癌細胞

YS968CB16B小鼠黑色素瘤細胞

YS969CB16-F10小鼠黑色素瘤細胞

YS970C株BAF3小鼠原B細胞

YS1177P小鼠棕色脂肪原代細胞

YS1178P豬主動脈內(nèi)皮原代細胞

YS1179P豬骨髓間充質干原代細胞

YS1180P大鼠肺微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1181P大鼠肺血管平滑肌原代細胞

YS1182P大鼠Ⅱ型肺泡上皮原代細胞

YS1183P大鼠氣管上皮原代細胞

YS1184P大鼠氣管平滑肌原代細胞

YS1185P大鼠肺成纖維原代細胞

YS1186P大鼠支氣管上皮原代細胞

YS1187P大鼠支氣管成纖維原代細胞

YS1188P大鼠肺大動脈平滑肌原代細胞

YS1189P大鼠肺大動脈內(nèi)皮原代細胞

YS1190P大鼠肺動脈成纖維原代細胞

YS1191P大鼠肺大靜脈內(nèi)皮原代細胞

YS1192P大鼠胰腺星狀原代細胞

YS1193P大鼠頜下腺上皮原代細胞

YS1194P大鼠乳腺上皮原代細胞

YS1195P大鼠骨髓基質原代細胞

YS1196P大鼠食管上皮原代細胞

YS1197P大鼠食管平滑肌原代細胞

YS1198P大鼠腸平滑肌原代細胞

YS1199P大鼠腸黏膜上皮原代細胞

YS1200P大鼠肝實質原代細胞

YS1201P大鼠小腸隱窩上皮原代細胞

YS1202P大鼠肝內(nèi)膽管上皮原代細胞

YS1203P大鼠胃黏膜上皮原代細胞

YS1204P大鼠肝竇內(nèi)皮原代細胞

YS1205P大鼠肝星狀原代細胞

YS1206P大鼠直腸平滑肌原代細胞

YS1207P大鼠小腸平滑肌原代細胞

YS1208P大鼠結腸平滑肌原代細胞

YS1209P大鼠小腸黏膜上皮原代細胞

YS1210P大鼠子宮內(nèi)膜上皮原代細胞

YS1211P大鼠卵巢顆粒原代細胞

YS1212P大鼠子宮頸上皮原代細胞

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